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超微量分光光度计如何测定核酸浓度

更新日期:2018年1月22日 大字 小字
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  Micro Drop超微量分光光度计买到手要如何使用呢?如何用来测定核酸浓度呢?

超微量分光光度计如何测定核酸浓度


  1、首先,Micro Drop 超微量分光光度计样品保留系统上下部的光学表面清洁干净的去离子水的2至3uL,吹打至较低的光学表面。
  2、接着关闭杠杆臂,要确保上层基座与去离子水相接触。然后抬起杠杆臂和一个清洁、无尘、干燥的实验室擦拭光学表面擦去。
  3、打开Micro Drop软件,然后选择相应的核酸程序,接着使用一个小批量的校准移液器缓冲液配药到比较低的光学表面,用来执行一个空白的测量。
  4、等到空白测量完成后,将两个光学表面与一个清洁、干燥、无尘的实验室擦拭干净。
  5、接着选择适当的常数要测量的样品。
  6、免除至较低的光学基座1uL的核酸样品,并且关闭力臂。由于测量的物体是独立的体积,所以样品只需要弥合两者之间的光学表面为测量的差距。
  7、在App中选择“测量”。App内会自动帮你算出核酸浓度和纯度比例。
  8、一个典型的核酸样本,将有一个非常有特点的姿态展现在你眼前。
  9、与特定的核酸分离技术相关的常见污染物的来源包括苯酚/Trizol法和列提取。在苯酚/Trizol法提取的情况下,残留试剂的污染可能是由220至240nm之间的异常光谱,以及在260?280nm区域的变化。相反,从列提取的残留胍可能导致附近230纳米的高峰期,在从230纳米到约240纳米的槽的转变。
  10、为了准确地评估样品的质量,260/280或二百三分之二百六十○比率应在与整体的光谱质量结合分析。纯核酸通常产量的1.8?260/280的比例和DNA和RNA的2.0?260/280的比例,分别。这个比率是依赖于用于空白和样品测量的缓冲pH值和离子强度。酸性溶液中会根据代表0.2-0.3的比例,而一个基本的解决方案将超过代表比例由0.2-0.3。显着不同纯度率可能表明存在蛋白质,酚或其他污染物,达到或接近280nm处的强烈吸收。二百三十零分之二百六十零纯度比一个“纯”核酸一般在1.8-2.2范围内的值的第二项措施是DNA的纯度。纯度的比例明显低于预期值低可能表明所使用的隔离技术,可能需要进一步优化。
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