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如何使用反向移液技术更精准的移取蛋白溶液

更新日期:2016年7月12日 大字 小字
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每支移液器的量程通常都用纯水和正向移液技术校准过。因此我们推荐使用正向移液技术移取水性溶液,如缓冲液,稀释酸或碱。当移取不同于水的液体时,由于具有不同的液体特性,其移液量可能偏离所选的量程。比如 一些生物溶液的移液,可能会在移液器尖端或试管中产生气泡或泡沫,这将使移液量产生偏差。在这种情况下,我们推荐使用反向移液技术移取高粘度或者容易产生泡沫的液体。反向移液技术减少了喷溅,泡沫和气泡形成。这种方法尤其适用于移取小体积的液体。

下面先介绍一下正向移液和反向移液技术的操作。

1.将按钮压至第一停点。

2.将吸头浸入液面下1cm处,缓慢释放按钮使其滑回原位。将吸头从液体中移出,接触容器边缘除去多余的液体。

3.排液时,吸头紧贴容器壁先轻按按钮至第一停点,略作停顿后,将按钮按至第二停点(这个操作会将吸头内的液体彻底排尽),将吸头从容器中沿容器壁移出。

4.松开按钮至准备位置。

 

1.将按钮压至第二停点。

2.将吸头浸入液面1cm处,缓慢释放按钮使其滑回原位。这将时液体充满吸头。将吸头从液体中取出,接触容器边缘去掉多余液体。

3.放液到接收容器时平稳地轻按按钮至第一停点。保持在这个位置。一些液体会残留在吸头中不能被放出。

4.残留在吸头内的液体能够被吹回原溶剂中或者同吸头一起丢弃。

5.松开按钮到准备位置。

    选择合适的移液器对于微量移液的精准性也很重要。

    我们使用0.5-10 μl移液器,配合10ul吸头,同时分别使用正向移液和反向移液,移取1%牛血清白蛋白(BSA,Sigma A7030)进行移液精准性测试。

图1 表明当使用反向移液技术时,移液量的变化比使用正向移液技术处于更狭窄的一个范围。

图2 表明使用两种移液方式的不精确度。不精确度是估量移液的重复性的。反向移液技术可以使不精确度相对于正向移液技术降低50%。

    这是因为,BSA溶液含有易被疏水移液器吸头壁吸附的疏水成分。当使用正向移液技术时,每次移液后少量的液体易残留在吸头中。这种趋势会增加吹出液体体积之间的偏差,因为当重复移液时吸头中累积的残余液体可能增加下一次移液的移液量。而反向移液技术中有额外的液体被吸入吸头中,这些额外的液体作用似一个蓄水池它使连续移液的移液量均等。这个蓄水池也能阻止空气在吹出液体的更后从吸头口进入,这样可以降低液体起泡的可能性。这使反向移液技术在移取小液量液体时尤其有用。由此可见,采用反向移液技术,可较好的提高移取蛋白溶液的精确度和重复性。

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