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青蒿素与菌液测定的前世今生

更新日期:2019年7月1日 大字 小字
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前言


由屠呦呦团队深度开发的青蒿素研究,在最近有了新的进展-通过增加用药周期和联合用药解决疟原虫对其耐药性[1]。而青蒿素也面临着价格昂贵及供应不足的难题,研究者利用菌体构建合成青蒿素的前体的研究[2]能够提供参考思路。




   

菌体的生长情况可用OD600初步判断菌落生长情况并间接测定菌落的密度,



是因为某特定波长下,菌悬液的细胞浓度仅在一定的范围内与对应的吸光度值呈正比关系,不同的是,针对非球状的放线菌和某些霉菌等以及培养基中有其他浑浊物质则不能通过该方法推断浓度。



如果菌液OD600在0.6-0.8之间,表明细菌处于旺盛生长的对数生长期细胞生长,OD600>3表明细菌已经饱和等,这些仅仅是粗略估计菌落的生长情况。



想要知道较为精确的菌落浓度,需要将制备好的菌悬液梯度稀释后,以未加菌液的培养基做空白对照,使用分光光度计分别测定OD600;并用平板计数法计算菌落总数。绘制标准曲线,来推算未知浓度菌液的生长状态。



若某一菌液的OD值为负,可能是细菌与培养基发生变色反应,颜色的改变影响吸光度数值。菌液在测定前保持悬浮状态能够保证测定的准确性。



由于600nm处对浊度的敏感度最高,常用600nm为检测波长,也可以对菌液进行全波长扫描,在其最大吸收峰波长下进行测定。


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[1] Wang J, Xu C, Liao F L, et al. A Temporizing Solution to “Artemisinin Resistance”[J]. New England Journal of Medicine, 2019.

[2]吴涛, 吴胜明, 殷晴, 等. 在大肠杆菌内引入甲羟戊酸途径高效合成抗疟药青蒿素前体——紫穗槐-4,11-二烯[J]. 生物工程学报, 2011, 27(7).

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